El cambio de comportamiento a través de ingeniería sináptica

PLOS

Worcester, MA – Investigadores de la Universidad de Massachusetts Medical School son los primeros en mostrar que es posible revertir el comportamiento de un animal accionando un interruptor en la comunicación neuronal. La investigación, publicada en la Biología journalPLOS de acceso abierto, proporciona un nuevo enfoque para el estudio de los circuitos neuronales que cambian el comportamiento y tiene importantes implicaciones para cómo los científicos piensan acerca de conectomas neuronales.

Las nuevas tecnologías han impulsado la búsqueda para mapear todas las conexiones neuronales en el cerebro para entender cómo estas redes de información y los procesos de control de comportamiento. El cerebro humano se compone de 1011 neuronas que producen 1015 conexiones. La longitud total de los procesos neuronales en el cerebro humano es de aproximadamente 4 millones de millas de largo, similar en longitud en el número total de carreteras en los EE.UU. A lo largo de estas redes, las neuronas se comunican entre sí a través excitatorias e inhibitorias sinapsis que convierten las neuronas encendido o apagado.

La hoja de ruta neuronal, o conectoma, sin embargo, no incluye información sobre la actividad de las neuronas o las señales que transmiten. ¿Qué tan estable son estos circuitos neuronales en el cerebro? ¿Su cableado limitar el flujo de información o los comportamientos que controlan? La complejidad del cerebro humano hace que sea casi imposible para hacer frente actualmente a estas preguntas.

Alkema y sus colegas recurrieron a los nematodo Caenorhabditis elegans para encontrar respuestas. Un pequeño gusano con sólo 302 neuronas, es el único animal para el que su hoja de ruta neuronal ha sido completamente definido.

En este estudio, Alkema y sus colegas intentaron determinar si voltear el signo de una sinapsis excitatoria del inhibidor de en el cerebro del gusano fue suficiente para revertir un comportamiento. Para ello, se analizaron un toque de respuesta que C. elegans utiliza para escapar de hongos depredadores. Durante esta respuesta, los neurotransmisores que activan un canal iónico inhibidora se liberan, provocando que el tornillo sin fin de relajarse la cabeza y rápidamente invertir la dirección lejos de la depredador.

Jenn Pirri, un estudiante de doctorado en el laboratorio Alkema y Diego Rayes, un ex miembro post-doctoral, ahora en el Instituto de Investigaciones Bioqu & # 237; micas de Bah & # 237; a Blanca, en Argentina, sustituyen el canal iónico inhibitoria con un excitador versión de la canal en un nematodo en vivo.

“Sorprendentemente, el canal de ingeniería no afecta el desarrollo de y se incorpora correctamente en los circuitos neurales del cerebro de gusano,” dijo el Dr. Alkema. “Sin embargo, las células que normalmente son inhibidas en el cerebro se activan ahora.”

“Lo más sorprendente es que hemos sido capaces de comportamiento completamente inversa simplemente cambiando el signo de una sinapsis en la red neuronal,” explicó Alkema. “Ahora el animal contrae, su cabeza y tiende a moverse hacia adelante en respuesta al tacto.” Esto sugiere que el diagrama de cableado neural es notablemente estable y permite que estos tipos de cambios.

“Nuestros estudios indican que el cambio en el signo de una sinapsis no sólo proporciona un mecanismo sintético novedoso para voltear el rendimiento del comportamiento sino que incluso podría ser un mecanismo evolutivo para cambiar el comportamiento”, dijo Alkema. “A medida que comenzamos a desentrañar la complejidad y el diseño de la red neuronal, que es una gran promesa como un nuevo mecanismo para probar la función del circuito o incluso diseñar nuevos circuitos neuronales en animales intactos.”

de datos a través de la herramienta en línea Waterviz del servicio forestal ayudado por la NSF grantUSDA Servicio Forestal – Estación del Norte

Incluso si usted está en ninguna parte cerca helada Hubbard Brook en las montañas blancas rugosas de New Hampshire, se puede sintonizar en el ciclo del agua con Waterviz, una herramienta en línea que crea el arte digital y desempeña una sinfonía bosque vivo generada a partir de sensores ambientales que se esperan en una valle de la montaña.

Waterviz – una colaboración de USDA Forest Service, NH EPSCoR, Noreste Centro de Ciencias del Clima, Plymouth State University, Universidad de Sistemas de la Tierra del Centro de Investigación de New Hampshire, de la Universidad Estatal de Ohio, y Simosol OY – está a punto de convertirse en una herramienta de la ciencia y la educación aún más fuerte con la ayuda de la Fundación Nacional de Ciencia (NSF).

Además de desarrollar aún más Waterviz en Hubbard Brook Bosque Experimental como herramienta de enseñanza para estudiantes de ciencias media y alta escuela, de la NSF 2 años, $ 300.000 “Early-concepto de subvención para la investigación exploratoria (EAGER)” también apoyar la creación de un Waterviz para el Bosque Experimental HJ Andrews, cerca de Blue River, Oregon. Con la presentación de los datos en formatos alternativos, los diseñadores esperan Waterviz aumentará la comprensión de los conceptos detrás de la ciencia y la alfabetización de datos. Su utilidad en entornos de educación también se extenderá a las exposiciones en los centros de ciencias y otros foros permitiendo a la gente en cualquier parte del mundo para intuir la dinámica del agua de esta pequeña tierras altas forestales de cuencas hidrográficas,.

“La educación científica y la alfabetización son una parte vital de la preparación de la próxima generación de líderes”, dijo Michael T. Las lluvias, Director de la Estación de Investigación del Norte y el Laboratorio de Productos Forestales. “Nos sentimos muy honrados de que la Fundación Nacional de Ciencias reconoció el potencial de Waterviz como una herramienta de enseñanza de la ciencia, y estamos muy orgullosos de trabajar con nuestros muchos socios para continuar perfeccionando y mejorar Waterviz.” NO APROBADO

Waterviz de Hubbard Brook fue creado por un equipo que incluye Lindsey Rustad, un jefe de equipo y ecologista de investigación con el Centro de Investigación del Norte, que se basa en el arroyo Bosque Experimental de Hubbard, junto con un equipo de científicos, especialistas en información visual, artista Xavier Cortada, músico y especialista en tratamiento con ultrasonidos Marty Quinn, y educadores. Diseño de Waterviz se basó en el conocimiento y la creatividad de muchas disciplinas como la ecología forestal, la hidrología, la informática, el arte y la música. Un vídeo sobre el proyecto Waterviz está disponible en: http: //waterviz.org/project.shtml

Uno de los puntos fuertes de Waterviz es que hace cerca de datos en tiempo real accesibles a los estudiantes que de otro modo no podrían ser contratados por los bosques o datos. “Creemos que Waterviz se acoplará a una comunidad más amplia de los estudiantes”, dijo Rustad. “Muchos estudiantes aprenden mejor visualmente, o incluso acústicamente vista cinético. Los estudiantes no pueden conectar con una presentación numérica de la ciencia del agua. Esta herramienta hace que los datos accesibles a ellos, así como a las personas con necesidades especiales de aprendizaje y para el público en general “.

Los datos detrás de la sinfonía y la visualización proviene de sensores ambientales integrados en el arroyo y el bosque circundante que monitorean los principales componentes del ciclo del agua y se reúnen más de 90.000 puntos de datos al día. Estas medidas conducen un modelo informático que calcula los componentes del ciclo del agua en el bosque. Al instante, estas entradas se manifiestan de manera fluida como animación flash, música, hojas de cálculo y las ciencias tradicionales, tablas y gráficos. Waterviz permitirá a los usuarios escuchar en los eventos de tiempo en los últimos 5 años, incluyendo la tormenta tropical Irene.

“Este es un nuevo medio para los educadores y está creando el arte digital en línea en tiempo real”, según Rustad. “Es nuestra esperanza que esta herramienta ayudará a conectar a los niños y adultos con nuestros bosques, se nutren e inspirar habilidades de pensamiento creativo, y fomentará nuevas formas de imaginar nuestras conexiones con nuestros bosques y nuestro planeta.”

Para los educadores, Waterviz hace visible lo invisible. “La interacción con los datos de la ciencia a través de medios visuales y auditivos puede transformar la comprensión de una persona joven del contenido”, dijo Debra Sue Lorenzen, director de educación de la Fundación de Parques de la ciudad en la Fundación de Parques de Nueva York “la ciudad tiene el honor de ayudar a apoyar el desarrollo y pilotaje del plan de estudios Waterviz para adolescentes tempranos como parte de nuestros programas después de la escuela y de verano “.

La misión de la Estación de Investigación del Norte del Servicio Forestal es mejorar la vida de la gente y ayudar a sostener los recursos naturales en el noreste y medio oeste a través de la ciencia de vanguardia y la entrega de información eficaz.

La misión del Servicio Forestal, que forma parte del Departamento de Agricultura de Estados Unidos, es de preservar la salud, la diversidad y la productividad de los bosques y praderas de la Nación para satisfacer las necesidades de las generaciones presentes y futuras. La agencia maneja 193 millones de acres de tierras públicas, provee asistencia a los propietarios de tierras estatales y privadas, y mantiene la mayor organización de investigación forestal en el mundo. Las tierras públicas del Servicio Forestal administra contribuyen más de $ 13 mil millones a la economía cada año hasta el gasto de los visitantes solo. Esas mismas tierras proporcionan el 20 por ciento del suministro de agua potable de la Nación, un valor estimado en $ 7.2 mil millones por año. La agencia tiene un papel, ya sea directa o indirecta en la administración de alrededor del 80 por ciento de los 850 millones de acres de bosque dentro de los EE.UU., de los cuales 100 millones de acres son los bosques urbanos, donde vive la mayoría de los estadounidenses.

medibles a través de bajo costo approachUniversity de Alabama en Tuscaloosa

IMAGEN: Trabajo en las Semanas de la bahía de Reserva Nacional de Investigación del Estuario de la costa oriental de la bahía móvil del condado de Baldwin, los investigadores instalaron recintos ajustables cerca de la costa, usarlos para simular baja, … ver más

Crédito: Dr. Eric Sparks, Universidad del Estado de Mississippi

Tuscaloosa, Ala. – Los científicos diseñó un nuevo método, en el lugar para el estudio de los impactos potenciales crecientes niveles del mar pueden tener sobre los humedales vitales, dijo un investigador de la Universidad de Alabama, quien dirigió un estudio de 17 de agosto de publicación que describe los aparatos modificables.

Principalmente utilizando materiales disponibles en la ferretería local, los científicos, incluyendo la Universidad de Arizona Dr. Julia cereza, diseñados, construidos y probados recintos de bajo coste, llamados vertederos, para simular de forma realista tres niveles de inundación de los humedales costeros. Simulando impactos del aumento del nivel del mar en el lugar y en las escalas más grandes habían demostrado previamente difícil.

“Espero que esto proporciona otros investigadores con una plantilla para hacer sus preguntas y para mejorar el método hemos documentado para realizar estudios de humedales costeros más grandes y mejores”, dijo Cherry, profesor asociado en el New College de la UA y su departamento de ciencias biológicas.

La investigación, publicación en la revista científica, Methods in Ecology and Evolution, fue co-escrito por George Ramseur Jr., del Departamento de Recursos Marinos de Mississippi; y los Dres. Eric Sparks, de la Universidad Estatal de Mississippi; y Justo Cebrian, de Dauphin Island Sea Lab y la Universidad del Sur de Alabama.

Algunos científicos predicen un mundo de calentamiento puede provocar el aumento del nivel del mar hasta en un metro en los próximos 85 años. Los aumentos en la frecuencia, intensidad y duración de las inundaciones de los humedales se espera que los resultados de los niveles del mar.

“Incluso los pequeños aumentos en el nivel del mar puede significar un aumento significativo en la inundación de estos pantanos,” dice cereza. “La comunidad vegetal que vive en estos humedales intermareales están adaptados para hacer frente a las tensiones de inundación, pero hay un límite más allá del cual el aumento de las inundaciones se vuelve cada vez más estresante y, finalmente, conduce a la mortalidad.”

Los humedales costeros con frecuencia sirven como una “última línea de defensa” contra sobretensiones asociadas con huracanes y otras tormentas, además de su papel como la pesca y como hábitats naturales de otras especies de importancia económica y ecológica, dijo el investigador UA.

Las plantas que viven en los humedales eliminan los contaminantes del suelo y el agua poco profunda, que sirve como filtros que protegen las aguas abiertas de la contaminación, dijo.

Trabajar en las Semanas de la bahía de Reserva Nacional de Investigación del Estuario de la costa oriental de la bahía móvil del condado de Baldwin, los investigadores instalaron los recintos ajustables cerca de la costa, usarlos para simular niveles bajos, intermedios y altos de inundación.

La investigación mostró diferentes profundidades de inundación y duraciones podrían ser manipuladas con éxito para el estudio, agregando realismo a los resultados de la investigación.

Las modificaciones a los vertederos les permitieron trabajar durante tanto de baja como de alta marea. Construido con un extremo abierto, las presas consisten en un panel de pared de plástico en paralelo a la costa y dos paredes laterales perpendiculares a la costa. válvulas de flujo de agua ajustable y agujeros de drenaje han permitido a los científicos para manipular los niveles de agua y las velocidades de escurrimiento.

Los pocillos que contenían los registradores de nivel de agua se instalaron en el interior de los recintos para medir la profundidad del agua en base a cambios en la presión. recintos más sofisticados, mencionados por los investigadores como “vertederos activos,” incluyen un mecanismo de bomba de agua y el temporizador.

Un enfoque típico en la investigación de aumento del nivel del mar es el uso de sistemas construidos artificialmente, llamados mesocosmos, en el que se replica el entorno natural.

Hay muchas ventajas a Mesocosmo estudios, incluyendo la capacidad de controlar estrechamente las variables, pero recreando un humedal en un entorno artificial normalmente requiere alterar la marisma natural, dijo Cherry. Además, esos estudios a menor escala, a menudo excluyen involuntariamente variables presentes e impactantes en entornos naturales, dijo.

“La combinación de un enfoque mesocosmo con un enfoque vertederos podría ser una combinación muy poderosa para tratar de comprender los impactos del aumento del nivel del mar en los humedales costeros”, dijo Cherry.

Alcanzar la perfección en sus habilidades a través de Baloncesto Campamentos Para Niños

13 de mayo

ByHoopslessons

Como el baloncesto como un juego se está poniendo muy popular, de manera similar un montón de técnicas y programas de formación se desarrollan para ayudar a los jugadores entusiastas y que aspiran a aprender más sobre el deporte. Uno de los campos de los deportes populares isBasketball para los muchachos.Hay un montón de organizaciones y clubes que realizan campamentos para niños con diferentes niveles de habilidades y experiencias. Aunque el objetivo de cada campamento varía de la otra, sin embargo, estos campamentos son muy beneficiosos para cada jugador. Reciben instrucciones directas de jugadores experimentados y profesionales y cumplen con otros participantes en el campamento.

Instrucciones para convertirse en un mejor jugador:

Usted puede ser un principiante en el baloncesto. Si te gusta el juego, es obvio que quiere avanzar y convertirse en un jugador mejor en el futuro próximo. Asegúrese de que usted siga las instrucciones entregadas por su entrenador. Además de eso, cuando se une a los campamentos, se encontrará con un montón de instrucciones valiosas y útiles a través de la mejora de sus habilidades.

Saltos verticales y de filmación:

Existen varias técnicas que usted necesita aprender para llegar a ser un jugador de baloncesto. Que van desde saltos verticales a disparos y muchos más, tiene que empaparse de habilidades con el fin de alcanzar la perfección. Por tanto, nunca debe pasar por alto la importancia de aHouston Baloncesto Trainerand también las maneras de conseguir entrenada. Hay beneficios tanto de la formación personal y de grupo, y por lo tanto, le corresponde a usted para decidir la naturaleza de la formación que desea para su nivel.

Gastar su verano:

Usted adquiere el entrenamiento de baloncesto durante todo el año. Sin embargo, el verano es el momento ideal para mejorar y centrarse en sus habilidades. Mientras que usted se está preguntando cómo gastar el próximo verano, es una buena idea para inscribirse en algunos campamentos de verano. Independientemente de si se trata de los campamentos de día o campamentos durante la noche usted aprenderá la verdadera diversión y parte aventurera del juego. Por otra parte, estos campos también puede ayudarle a obtener las mejores experiencias para su desarrollo integral.

Aptitud Y Resistencia:

Con la ayuda de la amplia variedad de programas de baloncesto, obtendrá la oportunidad de centrarse en su condición física y resistencia. Desde la capacidad aeróbica de fuerza funcional, la construcción de poder y se concentra en las áreas débiles son algunos de los aspectos cruciales ofTraining de Baloncesto.De hecho, a menos que obtenga una formación adecuada de los entrenadores profesionales, no va a ser posible para que te conviertas en un buen jugador. Por lo tanto, es el momento de prestar atención a este factor como muy pronto.

Para obtener más información acerca de los campos de baloncesto para niños y Houston Baloncesto Entrenador, pleasevisit la página web. –

Ruiseñores mostrar sus habilidades de paternidad a través de la canción

El canto del ruiseñor macho hembras dice lo buen padre que va a ser, según un estudio publicado en la revista de acceso abierto BMC Evolutionary Biology

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VIDEO: Este es un feeding.view ruiseñor más

Crédito: Conny Bartsch

El canto del ruiseñor macho hembras dice lo buen padre que va a ser, según un estudio publicado en el acceso abierto journalBMC Evolutionary Biology.

El estudio muestra que los mejores cantantes alimentar a sus hijos con más frecuencia, y que anuncian esto a posibles compañeros cantando de una manera más ordenada a través de la repetición de secuencias de la canción, y el uso de la canción más variable, incluyendo muchos diferentes “boca a boca”, “silbato” y canciones ‘trino’.

En torno al 80% de todas las especies de aves, los hombres juegan un papel clave en el aumento de sus crías. Ruiseñores machos alimentan a la hembra durante la incubación, proporcionan alimento a los pollos y defienden el nido contra los depredadores. Habilidades parentales de un varón, por lo tanto probable que sea un factor crucial para las mujeres al momento de elegir una pareja.

Aves hembras evaluar cualidades paternales sobre la base de rasgos, incluyendo la coloración del plumaje y comportamiento de cortejo. En ruiseñores, es elaborada canción nocturna de un varón antes de vincular la formación que se presume que es clave en la publicidad de sus habilidades como padre. Mientras que los machos son capaces de cantar alrededor de 180 diferentes tipos de canciones, poco se ha entendido en las características exactas de canciones que son importantes.

El autor principal, Conny Bartsch de Freie Universit & # 228; t Berlín, Alemania, dijo: “Durante mucho tiempo se ha pensado que una sola característica – el tamaño de la canción del repertorio de un pájaro – puede ser importante para las mujeres durante la elección de pareja. Sin embargo, nuestro estudio muestra que, en ruiseñores, es una mezcla de características específicas de canciones que parecen ser más importantes en la determinación de sus esfuerzos paternos.

“Estas características canción nunca se han descrito antes en cualquier otra especie, e incluir el ordenamiento secuencial de canciones y el uso de estructuras acústicos que más probablemente son difíciles de producir. Nos sorprendió que las múltiples funciones de la canción – en lugar de una característica canción ‘clave’ – estaban relacionados con el esfuerzo de alimentación masculino “.

Los investigadores estudiaron la relación entre la calidad de una canción antes de la formación masculina par, y lo bien que un padre que era entonces, en base a la velocidad a la que él proporcionó comida para sus polluelos. Estudiaron 20 ruiseñores masculinos, registro y análisis de su canto nocturno a principios de la temporada de cría. Tras la formación de parejas, analizaron secuencias de video de sus nidos y los datos de las etiquetas electrónicas unidas a las aves para registrar las visitas masculinas y determinar el nivel de atención paterna.

Ellos encontraron que los ruiseñores masculinas contribuyen sustancialmente a chick alimentación, a un nivel igual a las mujeres (en torno al 16 visitas nido por hora en promedio).

Varias características diferentes canciones estaban vinculados a mayores esfuerzos paternos por ruiseñores masculinos. Estos incluyeron tener un estilo de canto más ordenada – cantando repetidamente el mismo orden secuencial de los tipos de canciones. Los hombres que cantaban repertorios de canciones más complejas, indicados por muchos diferentes “boca a boca”, “silbato” y “trino” canción de tipos, también contribuyeron más al pollito alimentación.

Desde ruiseñores masculinos participan fundamentalmente en la cría de pollo, la inversión paterna podría ser una variable crucial para las mujeres en la elección de un compañero. Por tanto, estas funciones las canciones pueden haber evolucionado para señalar los beneficios directos a las hembras al evaluar el potencial de su compañero en el futuro cuidado paternal.

Para las especies con canción complejo, como el ruiseñor, el estudio sugiere que las mujeres dependen de múltiples señales de canciones para reunir rápidamente la información sobre su socio potencial e informar las decisiones de apareamiento.

Orden canción también se sabe que está asociado con la edad Nightingale masculina. Esto sugiere que el canto ordenado podría servir como un indicador de la experiencia con los caldos de cultivo, y podría significar más beneficios para las mujeres que eligen los hombres con esta calidad de canto.

ORNL, Hyundai Motor colaborando a través del nuevo acuerdo de I + D

/ Laboratorio Nacional de Oak Ridge DOE

IMAGEN: Martin Keller (izquierda), director asociado del laboratorio de la Dirección de Ciencias Ambientales de la Energía y en el Laboratorio Nacional de Oak Ridge, y Tae Won Lim, vicepresidente de Hyundai Motor Company, hizo una … Ver más

Crédito: Cortesía de ORNL

. Oak Ridge, Tennessee, 08 de junio – Hyundai Motor Company y el Departamento de Laboratorio Nacional de Oak Ridge de la Energía han firmado un acuerdo destinado a fortalecer la cartera de investigación y desarrollo de Estados Unidos de la automotriz.

Hyundai Motor Company y su filial Kia Motors Corp. serán identificar y proveer las necesidades de I + D de la industria del automóvil, proporcionando retroalimentación y tecnología Evaluación conceptos, consultar con ORNL en I + D los temas relacionados con la industria, y el desarrollo de los proyectos patrocinados por Hyundai potenciales a realizar bajo separado, acuerdos jurídicamente vinculantes.

Como fabricante de automóviles quinto más grande del mundo, Hyundai Motor Company emplea a más de 30.000 en los EE.UU., y más de 700.000 vehículos Hyundai y Kia se hacen en los EE.UU.

A través de este acuerdo, Hyundai Motor y UT-Battelle, que gestiona ORNL para el DOE, también trabajará para identificar las oportunidades de I + D de financiación de interés mutuo y coordinar reuniones para intercambiar información. Hyundai ve ORNL como proporcionar una gran experiencia en diversas áreas.

“Esta colaboración con ORNL se firme y acelerar nuestro desarrollo la tecnología como Hyundai se esfuerza por convertirse en fabricante de automóviles líder en el mundo,” dijo Lim Tae Won, vicepresidente y jefe del Instituto de Investigación e Ingeniería Avanzada central de Hyundai Motor Group. “El mercado estadounidense es estratégicamente muy importante, y nuestro objetivo es ser implacables en la búsqueda de nuevas tecnologías competitivas.

La primera colaboración está prevista para este otoño con un taller sobre el desarrollo de materiales y métodos de unión de varios materiales. Otras áreas de investigación serán exploradas como la asociación madura. ORNL también proporcionará coordinación con otros laboratorios nacionales para perseguir mejor tecnología y conocimientos técnicos.

El acuerdo también establece: “Guiados por sus principios corporativos globales para la localización, Hyundai Motor Company está expandiendo sus servicios de desarrollo de productos, diseño, I + D, fabricación y consumo en los EE.UU. para servir mejor a los clientes locales necesidades y para cumplir con la regulación del gobierno de EE.UU. requisitos en materia de eficiencia y seguridad del combustible.

‘Con este fin, Hyundai Motor Company está tratando de establecer relaciones de I + D de colaboración a largo plazo con los laboratorios nacionales y de otros institutos de investigación y organizaciones en los EE.UU. “

Noel Daniel, director adjunto del Programa de Transporte de ORNL, se señaló que el laboratorio tiene una larga historia de trabajo con la industria del automóvil para desarrollar y comercializar materiales avanzados y tecnologías de fabricación.

‘ORNL tiene mayor concentración de la nación de la investigación de materiales de código abierto que abarca todas las disciplinas de la ciencia de materiales e ingeniería de ciencia de los materiales fundamentales para el desarrollo de aleación, síntesis, fabricación, pruebas y caracterización “, dijo Daniel. “Esperamos que esta relación con Hyundai para traer vehículos a la vida, desde el diseño, la ingeniería y la producción en los EE.UU., lo cual es consistente con la misión de ORNL y el Departamento de Energía. ‘

El memorando de entendimiento es una expresión de la intención y no crea una obligación jurídicamente vinculante, ni compromete fondos de cualquiera de las partes.